بررسی امکان طراحی روش RT – PCR برای تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2 در نمونه های توموری بدخیم پستان

بررسی امکان طراحی روش RT – PCR برای تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2 در نمونه های توموری بدخیم پستان

پایان نامه سرطان پستان
طراحی روش RT – PCR
تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2
شناسایی تومورهای erbB2
شناسایی تومورهای erbB2 با ایمونوهیستوشیمی (IHC)

رفتن به سایت اصلی

رساله دکترای رشته پزشکی

 

بررسی امکان طراحی روش RT – PCR برای تشخیص ازدیاد بیان ژنی ژن HER2 در نمونه های توموری بدخیم پستان

 

 

 

چکیده:

سرطان پستان از شایع ترین سرطان های زنان است که سبب مرگ زنان زیادی می شود. موتاسیون های بسیاری نظیر ازدیاد آنکوژن ها و یا حذف ژن های سرکوبگر تومور در این سرطان شناسایی شده اند؛ در بین آنکوژن ها، erb-B2 که به خانواده EGFR (گیرنده فاکتور رشد اپیدرمی) تعلق دارد در 30%-25% تومورهای پستان با منشاء سلول های داکتال ازدیاد پیدا می کند. (80% سرطان های پستان منشا داکتال دارند.)در بیمارانی که erb-B2 در آن ها ازدیاد پیدا کرده بیماری می تواند تا حدی با استفاده از یک آنتی بادی مونوکلنال انسانی شده علیه محصول پروتئینی ژن erb-B2 به نام هرسپتین مهار شود.از این رو شناسایی تومورها یی که erb-B2 در آن ها ازدیاد پیدا کرده اهمیت دارد.روش روتین در شناسایی این تومورها ایمونوهیستوشیمی (IHC) می باشد.

 

در این مطالعه 50 نمونه از بیمارستان دی جمع آوری شد که بر اساس نتایج IHC، 32% نمونه ها ازدیاد آنکوژن erb-B2 را نشان می دادند.جهت مقایسه RT-PCR و IHC، RNA این نمونه ها استخراج شد و RT-PCR برای آن ها انجام شد که در آن دو جفت پرایمر طراحی شده به طور همزمان ژن erb-B2 را به همراه ژن بتاگلوبین به عنوان کنترل داخلی تکثیر می کردند؛ سپس محصولات RT-PCR بر روی ژل آگاروز برده شدند و شدت باند های مربوط به erb-B2 و کنترل داخلی با یکدیگر مقایسه گردید. در نهایت از مقایسه نتایج حاصله از RT-PCR با نتایج IHC مشخص شد که بازده RT-PCR در تشخیص نمونه های با درجه IHC 3+، 100% و در مورد نمونه های 2+، نیز 100% می باشد.   همچنین آزمایش PCR بر روی DNA استخراج شده از بافت توموری و DNA نرمال استخراج شده از بافت فرد سالم انجام گرفت که نتایج مربوط به این آزمایش نیز نتایج بدست آمده از RT-PCR را تایید می کردند. 

 

 

کلمات کلیدی:

سرطان

داکتال

آنکوژن ها

موتاسیون

سرطان پستان

سرطان های زنان

مقایسه RT-PCR و IHC، RNA

 

 

مقدمه:

 در پستان نرمال، داکتها و لوبولها بوسیله دو نوع سلول فرش می شوند یک دسته سلول های مسطح که یک لایه ناپیوسته از سلول های قابل انقباض حاوی میوفیلامان ها هستند (سلول های میواپی تلیال  ) و روی غشای پایه قرار دارند . این سلول ها در خروج شیر در طی دوره شیر سازی همکاری می کنند و نقش مهمی در حفظ ساختار و عملکرد نرمال لوبول ها و غشای پایه دارند (86). لایه دومی از سلول‌های پوششی کف لومن را فرش کرده است ( سلول های لومینال   ). 

 

داکت های انتهایی و لوبولها شیرتولید می کنند ولی سلول های بخشهای دیگر داکت، در تولید شیر نقشی ندارند.منشأ سلول های لومینال و اپیتلیال ، سلول های بنیادی واقع در ترمینال داکت ها در نظر گرفته  می شود(6). بخش اصلی بستر پستان از بافت پیوندی فیبروس متراکم مخلوط با بافت چربی تشکیل شده است که همان  بستره بین لوبولی  است. لوبولها بوسیله یک بستره ظریف احاطه شده اند که بافت ویژه پستان است و خصوصیات پاسخ دهنده به هورمون دارد و دارای تعدادی  لنفوسیت می باشد  (85).  

 

 

 

فهرست مطالب

چکیده: 1

فصل اول:مقدمه 5

1-1- غدد پستانی 6

1-1-1- ساختار پستان نرمال 6

شکل (1-1 )- ساختار پستان نرمال (55) 7

1-1-2- تغییرات پستان در چرخه زندگی 8

1-2 -کارسینومای پستان 10

1-2-1-کارسینوما 10

1-2-2- ریسک فاکتورها 12

1-2-3- سبب شناسی سرطان پستان 16

1-2-5- سرطان پستان غیر وراثتی 19

1-2-5-1-2- تومور ساپرسورها 21

1-2-5-1-4- مسیرهای بقای سلولی و مرگ سلولی 23

1-2-5-1-4-1- تلومراز 23

1-2-5-1-4-2- ژن های وابسته به آپوپتوز 24

1-2-6-1- طبقه بندی کارسینوماهای پستان بر اساس مطالعات میکرواری (از لحاظ ملکولی) 26

1-2-6-1-1-کارسینوماهای ER- مثبت 26

1-2-6-1-2-کارسینومای های ER- منفی 26

1-2-6-1-3-کارسینوماهای  Basal-like 27

1-2-6-1-4-کارسینوماهای HER2/neu- مثبت 27

شکل 1-3- نمای شماتیک خانواده HER (90) 28

1-2-7- طبقه بندی کارسینوماهای پستان از لحاظ بافت شناسی 31

1-2-7-1- کارسینوما های در جا و تهاجمی(شکل 1-6 ) 31

شکل (1-5) – کارسینوماهای درجا و تهاجمی (85) 32

 

فصل دوم:مروری بر مطالعات انجام شده 34

2-1- تکنیک های سنجش HER2/neu 35

2-1-1- ایمونوهیستوشیمی (IHC) 35

2-1-2- ساترن و اسلات بلات 37

2-1-3-تکنیک FISH 37

2-1-4- تکنیک CISH ) (Chromogenic in situ hybridization 38

2-1-5- تکنیک ( Enzime – linked immunosorbent assay ) ELISA 38

2-2- وضعیت HER2 و پیشگویی پاسخ به درمان با هرسپتین 40

2-3- HER2/neu فسفریله به عنوان یک مارکرپروگنوستیک و پیش گویی بالقوه 41

2-4- سنجش بخش خارج سلولی HER2 در جریان خون به عنوان تومور مارکر 41

2-5- خلاصه 42

2-2- هدف 43

 

فصل سوم:مواد و روشها 44

مواد و روشها 44

3-1- استخراج RNA ی كل از بافت 45

3-2- بررسی كمی و كیفی RNA ی استخراج شده 50

3-2-1- UV اسپكتروفتومتری 50

3-2-2- الكتروفورز ژل آگارز (106) 52

طرز تهیه محلول ها و بافرهای مورد نیاز در الكتروفورز : 53

محلول اتیدیوم بروماید (10 mg /ml) 54

مواد و وسایل لازم 55

جدول 3-1 – رابطه درصد ژل آگارژ با اندازه مولكول DNA 58

3-3 تیمار RNAی استخراج شده با آنزیم DNase [149] 58

طرز تهیه مخلوط dNTP از هر یك از نوكلئوتیدها 60

3-5- واكنش PCR [2] 63

3-5-1 طراحی پرایمر: 63

3-5-2- آماده سازی پرایمرهای PCR [2] 66

3-7- استخراج DNA از بافت پستانداران با استفاده از Accuprep Genomic DNA Extraction kit (Bioneer) 70

3-7-1- سنجش غلظت DNA 71

3-9- ایمنوهیستوشیمی Immunohistochemical (IHC) Techniques 73

 

فصل چهارم:بحث و نتایج 76

بحث و نتایج 76

4-1- نتایج 77

4-1-1- تعیین کیفیت و کمیت RNA ی استخراجی 77

4-1-2- بهینه سازی واکنش PCR 78

4-1-3-  RT – PCR 80

4-2-  بحث و پیشنهادات 84

4-2-1- بحث 84

4-2-2- علت انتخاب RT- PCR 85

4-2-4- پیشنهادات 87

منابع 88

 

 

 

بررسی اثر استراتژی مدیران آموزشی بر تغییر و تحول سازمانی آموزشگاههای منطقه 2 تهران

بررسی اثر استراتژی مدیران آموزشی بر تغییر و تحول سازمانی آموزشگاههای منطقه 2 تهران دانلود پایان نامه رشته علوم تربیتی دانلود پایان نامه علوم تربیتی بررسی اثر استراتژی مدیران آموزشی بر تغییر و تحول سازمانی آموزشگاههای منطقه 2 تهران اثر…

مدیریت منابع در دسترس شبکه به منظور بهبود کارایی شبکه های مشارکتی

مدیریت منابع در دسترس شبکه به منظور بهبود کارایی شبکه های مشارکتی شبکه های مشارکتی شبکه های مبتنی بر شناخت سیستم های بیسیم مشارکتی تخصیص منابع در شبکه های مشارکتی مدیریت منابع در دسترس شبکه به منظور بهبود کارایی شبکه…

مسئولیت کیفری پزشک در قانون مجازات اسلامی جدید

مسئولیت کیفری پزشک در قانون مجازات اسلامی جدید مسئولیت کیفری پزشکان مسئولیت جزایی پزشک مبانی فقهی مسئولیت پزشکان شرایط مسئولیت کیفری پزشک مسئولیت کیفری و مدنی پزشک مسئولیت کیفری پزشکان در حقوق ایران مسئولیت کیفری پزشک در قانون مجازات جدید…

مبانی نظری و پیشینه تحقیق ​​​​​​​راهبردهای مقابله ای با استرس

مبانی نظری و پیشینه تحقیق ​​​​​​​راهبردهای مقابله ای با استرس کلمات کلیدی : فصل دوم پایان نامه ​​​​​​​راهبردهای مقابله ای با استرس مبانی نظری ​​​​​​​راهبردهای مقابله ای با استرس پیشینه تحقیق ​​​​​​​راهبردهای مقابله ای با استرس پیشینه داخلی ​​​​​​​راهبردهای مقابله…

بررسی رابطه میان سرمایه اجتماعی و مشارکت سیاسی زنان در بین دانشجویان دانشگاه فردوسی مشهد

بررسی رابطه میان سرمایه اجتماعی و مشارکت سیاسی زنان در بین دانشجویان دانشگاه فردوسی مشهد اعتماد اجتماعی مشارکت سیاسی انجمن های داوطلبانه شبکه های اجتماعی رابطه میان سرمایه اجتماعی و مشارکت سیاسی زنان بررسی رابطه میان سرمایه اجتماعی و مشارکت…

تحلیل های آماری در برنامه ریزی روستایی دکتر مصطفی طالشی و دکتر پرویز نصیری

تحلیل های آماری در برنامه ریزی روستایی دکتر مصطفی طالشی و دکتر پرویز نصیری کلمات کلیدی : تحلیل های آماری در برنامه ریزی روستایی دکتر مصطفی طالشی و دکتر پرویز نصیری رفتن به سایت اصلی تحلیل های آماری در برنامه…

چارچوب نظری و پیشینه پژوهش امنیت

چارچوب نظری و پیشینه پژوهش امنیت مبانی نظری امنیت پیشینه امنیت دانلود مبانی نظری امنیت پیشینه تحقیق امنیت ادبیات نظری امنیت فصل دوم پایان نامه امنیت مبانی نظری و پیشینه تحقیق امنیت ادبیات و مبانی نظری امنیت رفتن به سایت…

پروپوزال بررسی مولفه های کلیدی ارزیابی عملکرد مدیریت اعضا هیات علمی دانشگاه

پروپوزال بررسی مولفه های کلیدی ارزیابی عملکرد مدیریت اعضا هیات علمی دانشگاه ارزیابی عملکرد کارکنان پروپوزال ارزیابی عملکرد پروپوزال ارزیابی عملکرد کارکنان شاخص های ارزیابی عملکرد کارکنان شاخص های کلیدی ارزیابی عملکرد مدل های نوین ارزیابی عملکرد کارکنان پروپوزال ارزیابی…

شغل روزنامه نگاری

شغل روزنامه نگاری روزنامه روزنامه نگاری نظام آگهى در ایران دانلود مقاله شغل روزنامه نگاری روزنامه نگاران و مشكلات معیشتى پیچیدگى هاى نظام آگهى در ایران حقوق و‎ ‎امتیازهای روزنامه نگار همکاری در فروش فایل همکاری در فروش فروش فایل…

پرسشنامه ارائه روشهای توسعه گردشگری روستایی و جذب گردشگر

پرسشنامه ارائه روشهای توسعه گردشگری روستایی و جذب گردشگر کلمات کلیدی : پرسشنامه جذب گردشگر پرسشنامه جذب گردشگری پرسشنامه توسعه روستایی پرسشنامه گردشگری روستایی پرسشنامه راهکارهای جذب گردشگر پرسشنامه راهبردهای جاذبه توریستی پرسشنامه توسعه گردشگری روستایی پرسشنامه روشهای توسعه گردشگری…

پرسشنامه استاندارد محقق ساخته سنجش عملکرد ریاضی

پرسشنامه استاندارد محقق ساخته سنجش عملکرد ریاضی کلمات کلیدی : پرسشنامه عملکرد ریاضی دانلود پرسشنامه عملکرد ریاضی پرسشنامه استاندارد عملکرد ریاضی پرسشنامه محقق ساخته عملکرد ریاضی پرسشنامه عملکرد ریاضی محقق ساخته رفتن به سایت اصلی آزمون محقق ساخته برای سنجش…

گردشگری به عنوان یک سیستم: نمونه مشهد

گردشگری به عنوان یک سیستم: نمونه مشهد دانلود مقاله گردشگری به عنوان یک سیستم نمونه مشهد عرضه و تقاضا نهادی فرادست سیستم گردشگری مدیریت یكپارچه گردشگری سیستم همکاری در فروش فایل همکاری در فروش فایل همکاری در فروش فروش فایل…

ارزیابی ارتباط مدیریت ریسک اعتباری با مطالبات معوق بانک ملی ایلام

ارزیابی ارتباط مدیریت ریسک اعتباری با مطالبات معوق بانک ملی ایلام پااین نامه مطالبات معوق بانک ملی مدیریت ریسک اعتباری رتبه بندی مشتریان بانک اعتبارسنجی مشتریان بانک مدیریت ریسک اعتباری در بانک ملی رابطه بین مدیریت ریسک اعتباری با مطالبات…

رابطه مدیریت دانش و مدیریت کیفیت جامع در شركت های بیمه

رابطه مدیریت دانش و مدیریت کیفیت جامع در شركت های بیمه پایان نامه مدیریت دانش پایان نامه مدیریت کیفیت جامع مدیریت دانش در شركتهای بیمه مدیریت کیفیت جامع در شركتهای بیمه استقرار مدیریت دانش در شرکتهای بیمه پیاده سازی مدیریت…

بررسی و تشریح حوزه های طرحواره و طرحواره ناسازگار اولیه

بررسی و تشریح حوزه های طرحواره و طرحواره ناسازگار اولیه کلمات کلیدی : حوزه های طرحواره طرحواره ناسازگار اولیه ریشه های شکلگیری طرحواره حوزه های طرحواره ناسازگار اولیه تحقیق طرحواره ناسازگار اولیه تحقیق حوزه های طرحواره ناسازگار اولیه رفتن به…

بررسی تطبیقی حقوق ایران و انگلیس

بررسی تطبیقی حقوق ایران و انگلیس سیستم حقوقی ایران سیستم حقوقی انگلیس بررسی تطبیقی حقوق ایران و انگلیس لیبرالیسم در ایران آزادی های عمومی حقوق شهروندی رفتن به سایت اصلی بررسی تطبیقی حقوق ایران و انگلیس   مقدمه  مطالعه تطبیقی…

مبانی نظری و پیشینه تحقیق راههای مقابله با استرس 59 صفحه

مبانی نظری و پیشینه تحقیق راههای مقابله با استرس 59 صفحه کلمات کلیدی : مبانی نظری راههای مقابله با استرس ادبیات نظری راههای مقابله با استرس چارچوب نظری راههای مقابله با استرس فصل دوم پایان نامه راههای مقابله با استرس…

سنجش تاثیر سبک رهبری مدیران مدرسه بر رضایت شغلی معلمان

سنجش تاثیر سبک رهبری مدیران مدرسه بر رضایت شغلی معلمان رضایت شغلی معلمین سبک رهبری مدیران سبک رهبری مدیر مدرسه میزان رضایت شغلی معلمین رضایت شغلی معلمین خانم در تهران سنجش میزان رضایت شغلی دبیران زن تاثیر سبک رهبری مدیران…

حقوق فناوری اطلاعات و ارتباطات

حقوق فناوری اطلاعات و ارتباطات امضای الكترونیكی حقوق فناوری اطلاعات فناوری اطلاعات و ارتباطات دانلود مقاله رشته حقوق حقوق فناوری اطلاعات و ارتباطات دانلود مقالات حقوق خرید مقالات حقوق سیستم همکاری در فروش فایل همکاری در فروش فایل فروش فایل…

نمونه فصل سوم پایان نامه مدیریت خودکارآمدی رهبری

نمونه فصل سوم پایان نامه مدیریت خودکارآمدی رهبری کلمات کلیدی : فصل سوم خودکارآمدی فصل سوم پایان نامه خودکارآمدی فصل سوم خودکارآمدی رهبری فصل سوم پایان نامه خودکارآمدی رهبری فصل سوم پایان نامه کارشناسی ارشد روانشناسی فصل سوم پایان نامه…

مبانی نظری و پیشینه تحقیق پیاده سازی مدیریت دانش

مبانی نظری و پیشینه تحقیق پیاده سازی مدیریت دانش مبانی نظری پیاده سازی مدیریت دانش دانلود مبانی نظری پیاده سازی مدیریت دانش پیشینه تحقیق پیاده سازی مدیریت دانش ادبیات نظری پیاده سازی مدیریت دانش فصل دوم پایان نامه پیاده سازی…

پروپوزال ارائه روشی نوین و تلفیقی جهت ارزیابی عملکرد سازمانی

پروپوزال ارائه روشی نوین و تلفیقی جهت ارزیابی عملکرد سازمانی ارزیابی عملکرد شهرداری اصفهان ارزیابی عملکرد شهرداری ها شاخص های ارزیابی عملکرد شهرداری ها ارزیابی عملکرد با کارت امتیازی متوازن کاربرد QFD در ارزیابی عملکرد ارزیابی عملکرد سازمان با QFD…

محیط ورزشی مدارس و ویژگی های کالبدی مدارس خلاق

محیط ورزشی مدارس و ویژگی های کالبدی مدارس خلاق کلمات کلیدی : محیط مدارس محیط ورزشی مدارس ویژگی های کالبدی مدارس خلاق تحقیق در مورد محیط مدارس تحقیق در مورد محیط ورزشی مدارس رفتن به سایت اصلی هدف از این…

اسلایدهای درس مباحث نو کتاب اصول امنیت سیستمها و شبکه های رایانه ای قاضی مغربی و بختیاری

اسلایدهای درس مباحث نو کتاب اصول امنیت سیستمها و شبکه های رایانه ای قاضی مغربی و بختیاری کلمات کلیدی : اسلایدهای درس مباحث نو کتاب اصول امنیت سیستمها و شبکه های رایانه ای قاضی مغربی و بختیاری رفتن به سایت…

مبانی نظری و پیشینه تحقیق تبلیغات موبایلی

مبانی نظری و پیشینه تحقیق تبلیغات موبایلی کلمات کلیدی : مبانی نظری تبلیغات موبایلی ادبیات نظری تبلیغات موبایلی چارچوب نظری تبلیغات موبایلی فصل دوم پایان نامه تبلیغات موبایلی دانلود مبانی نظری تبلیغات موبایلی پیشینه تبلیغات موبایلی پیشینه تحقیق تبلیغات موبایلی…

پاسخی بگذارید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *